LTT – virusul SARS-COV-2

LTT (test de transformare limfoblastica) – virusul SARS-COV-2

Această analiză se poate recolta doar în anumite centre Synevo, conform unui program special, din cauza stabilității reduse a probei recoltate:

• Alba Iulia: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Alba Iulia (B-dul Revoluției 1989, nr. 47, bl. CF 1, parter), în zilele de marți, în intervalul orar 09:00 – 10:00, cu programare telefonică (0757.112.409/ 0258.701.544).
• Alexandria: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Alexandria (Str. Libertății, bl. K3), în zilele de marți, în intervalul orar 11:00 – 12:00
• Arad: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Banu Mărăcine (Str. Banu Maracine, nr. 24, bl.1/A, sc. D, parter) în zilele de Luni, în intervalul orar 11:45 – 12:30 și în Laborator și centru de recoltare Arad (Str. Lt. Mj. Duma, nr.1, Bl. 338, Sc. A, Ap. 21, Parter)  în zilele de Luni, în intervalul orar: 11:30 – 13:00.
• Brăila: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Dorobanților (B-dul Dorobantilor, nr 5, Bl. A5, Parter), în zilele de marți: în intervalul orar 10:00 – 11:00, cu programare telefonică
• Brașov: recoltarea se efectuează în Laborator și centru de recoltare Aurel Vlaicu (Str. Aurel Vlaicu nr. 2), în zilele de marți, în intervalul orar 10:00 – 10:30, cu programare telefonică (0268 424 072/ 073)
• București: recoltarea se efectuează în Laborator și centru de recoltare Iancu de Hunedoara ( B-dul Iancu de Hunedoara, nr. 29F) și Centrul de recoltare Ștefan cel Mare (Șos. Ștefan cel Mare, nr. 56, bl. 38, parter), în zilele de marți, în intervalul orar 11:30 – 13:00, cu programare telefonică în call center (021 9666) și Laborator și centru de recoltare Chiajna (Str. Industriilor, nr. 25, Chiajna, Ilfov) în zilele de marți, în intervalul orar 13.00 – 14.00
• Buzău: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Marghiloman (Str. Al. Marghiloman, Cartier Bazar – Obor, bl. 2B, parter), în zilele de marți, în intervalul orar 12:00 – 14:00.
• Cluj: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Moților (Str. Moţilor, nr. 9A), Centrul de recoltare Mănăștur (Str. Primăverii nr. 8, ap. 182, parter), Centrul de recoltare Mărăști (Str. Aurel Vlaicu nr. 1), Centrul de recoltare Zorilor (Str. Observatorului, nr. 90), Centrul de recoltare Grigorescu (Str. Miraslău, nr. 4) și în Centrul de recoltare Florești (Str. Eroilor, nr. 17, com. Florești), în zilele de marți, în intervalul orar 10:00 – 11:30
• Constanța: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Policlinica nr. 1 (B-dul Tomis, Nr. 145 – în incinta Policlinicii Nr. 1.) și Laborator și centru de recoltare Constanța (Bd. Tomis nr. 145, în incinta Spitalului județean) în prima zi de marți din lună, în intervalul orar 11:00 – 12:30.
• Craiova: recoltarea se efectuează în Laborator și centru de recoltare Craiova(Str. Alexandru Macedonski nr. 53, corp C2), în zilele de marți, în intervalul orar 08:00 – 10:00.
• Deva: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Deva (Bd. 1 Decembrie nr. 2, bl. 4, parter), în zilele de marți, în intervalul orar 09:00 – 10:00, cu programare telefonică (‪0751 126 077/ 0254 262 112).
• Galați: recoltarea se efectuează în Laborator și centru de recoltare Galați (B-dul George Cosbuc nr. 251, Bl. Italian Residence) în zilele de marți, în intervalul orar 09:00 – 10:00, cu programare telefonică (0236455671)
• Giurgiu: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Giurgiu (Str. Nicolae Bălcescu, bl. V32), în zilele de marți, în intervalul orar 10:30 – 11:30
• Oradea: recoltarea se efectuează în Laborator și centru de recoltare Coposu (Str. Corneliu Coposu, nr. 2), Centrul de recoltare Magheru (Bulevardul Magheru, nr. 8, bl. M8, parter) și Centrul de recoltare Decebal (B-dul. Decebal, nr. 22, bl. c104/b), luni: 10:00 – 11:00
• Pitești: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Centrul de recoltare Victor Babeș (Str. Dr. Victor Babeș, nr.12) în zilele de marți, în intervalul orar 13:00 – 14:00.
• Ploiești: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Gheorghe Doja (Str. Ion Maiorescu, FN, Bloc 33 N1, parter (vis-a-vis de sediul BCR Ploiești) în zilele de marți, în intervalul orar 12:00 – 13:00.
• Râmnicu Vâlcea: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Râmnicu Vâlcea 1 (Calea lui Traian nr. 183, bl. 15, parter), în zilele de marți, în intervalul orar 12:00 – 13:00 și Centrul de recoltare Râmnicu Vâlcea 2 (B-dul Tineretului, nr. 3, bl A11/3, parter), în zilele de marți, în intervalul orar 11:00 – 12:00.
• Sibiu: recoltarea se efectuează în Laborator și centru de recoltare Sibiu (Calea Dumbrăvii, nr. 17), se efectuează în Laborator și centru de recoltare Sibiu (Calea Dumbrăvii, nr. 17), în zilele de marți, în intervalul orar 10:00 – 11:00, cu programare telefonică (0269 243 361/ 0741 215 858)
• Târgoviște: recoltarea se efectuează în Centrul de recoltare Târgoviște (Str. Col. Dumitru Băltărețu nr. 70, parter), în zilele de marți, în intervalul orar 10:00 – 12:00
• Timișoara: recoltarea se efectuează în Laborator și centru de recoltare Timișoara (Str. Simion Bărnuţiu, nr. 21) și Centrul de recoltare Tudor Vladimirescu (Splaiul Tudor Vladimirescu, Nr. 10, Demisol) în zilele de luni, în intervalul orar 11:00 – 13:00

Informatii generale – LTT SARS-COV-2

Până în prezent, diagnosticul de laborator pentru evaluarea imunităţii după COVID-19 a fost bazat doar pe dozarea anticorpilor produşi împotriva virusul SARS-CoV-2. Anticorpii pot preveni sau limita infecția, eliminând agenţii patogeni prin efect de neutralizare. Cu toate acestea, nu toți pacienții dezvoltă o cantitate măsurabilă de anticorpi după expunerea la virus, mai ales în cazul infecțiilor asimptomatice sau cu manifestări uşoare. Studiile științifice efectuate până în prezent, arată că în unele cazuri, după infecție, anticorpii persistă doar o perioadă scurtă; similar cu răspunsul imun din infecţia cu SARS-CoV-1 din 2003. Răspunsul imun celular, pe de altă parte, joacă un rol central în apărarea antivirală, limfocitele T cu memorie persistă câțiva ani si conferă protecție împotriva reinfecțiilor severe1; 2; 3; 4.

Detectarea limfocitelor T sensibilizate la virusul SARS-CoV2 reprezintă un alt element important în diagnosticul de laborator al COVID-19. Celulele pacientului sunt stimulate cu peptide specifice, provenind din clivarea glicoproteinei de suprafaţă a virusului (proteina S). Testul utilizează un amestec de peptide din 2 zone: capătul C-terminal (C-term) și capătul N-terminal (N-term) (Fig. 1).

Figură 1. Stimularea se efectuează cu o „gama de peptide” de 158 peptide suprapuse, de la capătul N-terminal, respectiv 157 peptide de la capătul C-terminal.

Peptidele de la capătul N-terminal au specificitate înaltă pentru SARS-CoV-2, în timp ce cele de la capătul C-terminal prezintă omologii mai mari cu alte beta coronavirusuri. O reacție izolată faţă de peptidele de la capătul C-terminal este asociată cu reactivitatea încrucișată la alte beta coronavirusuri. Persoanele infectate cu SARS-CoV-2 (PCR-pozitiv) prezintă o reactivitate clară atât la peptidele de la capătul N-terminal cât și la cele de la capătul C-terminal, chiar și la 5 luni după infecție.Figură 1. Stimularea se efectuează cu o „gama de peptide” de 158 peptide suprapuse, de la capătul N-terminal, respectiv 157 peptide de la capătul C-terminal.

 Figură 2 Reprezentarea activării limfocitelor T de către peptide: Cel mai important semnal pentru activarea unei celule este recunoașterea specifică a unui peptid de către receptorul specific (TCR).

Recomandări de testare

• Suspiciune de infecție în antecedente, fără rezultat pozitiv la serologie;
• Pacienți cu PCR pozitiv, dar fără anticorpi detectabili;
• Persoane vaccinate care nu au dezvoltat anticorpi.

Specimen recoltat – sânge venos.

Recipient de recoltare – vacutainer cu heparinat de litiu; vacutainer fără anticoagulant cu gel activator.

Volum proba – 20 mL sânge heparinat si 5 mL ser.

Stabilitate proba – sângele trebuie să ajungă în max. 24 ore la laboratorul la care se efectuează testul şi în aceasta perioadă se păstrează la temperatura camerei. Este contraindicată refrigerarea probei.

Cauze de respingere a probei – specimene care au depăşit intervalul de stabilitate, probe refrigerate sau congelate.

Metoda – încorporarea unui nucleozid radioactiv (timidina) în ADN-ul celular.

Interpretarea rezultatelor

Răspunsul imun celular mediat de limfocitele T conferă un grad de protecție faţă de virus. Aproximativ 10% dintre pacienții simptomatici şi cca. 40% dintre cei asimptomatici prezintă niveluri scăzute de anticorpi după o perioada mai îndelungată de la infecţie. Demonstrarea reactivității celulare faţă de virus rămâne singura metoda de confirmare a infecției în antecedente la acești pacienți. Persoanele infectate cu SARS-CoV-2 (PCR-pozitiv) prezintă o reactivitate clară la amestecul de peptide, rezultatele menţinându-se pozitive până la 5 luni după infecție.

Unele persoane neinfectate pot prezenta reactivitate doar faţă de peptidele de la capătul C- terminal. Aceasta reactivitate arată contactul anterior cu alte coronavirusuri endemice (229E, OC43, NL63 si HUK1). Unele studii, aflate încă in derulare, par să indice o imunitate parțială faţă de SARS-CoV-2 la acești pacienți, ceea ce se corelează cu forme asimptomatice sau ușoare la unii pacienți. Aceste informații trebuie însă confirmate în studii clinice care să includă un număr mare de pacienţi1; 2; 3; 4.

Bibliografie

1. Why does the coronavirus spread so easily between people? Mallapaty , Nature, 579, 2020
2. Antibody responses to SARS-CoV-2 in patients with COVID-19 Quan-Xin Long, Bai- Zhong Liu, Ai-Long Huang, Nature Medicine volume 26, 2020
3. Virus-Specific Memory CD8 T Cells Provide Substantial Protection from Lethal Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus Infection Rudragouda Channappanavar, Craig Fett, Jincun Zhao, David K. Meyerholz, and Stanley Perlman, J , 2014
4. SARS-CoV-2-reactive T cells in healthy donors and patients with COVID-19, Julian Braun, Lucie Loyal, Andreas Thiel, Nature, 2020