Imunocitochimic CIN2+ (CINtec​​®​ PLUS)

Informații generale și recomandări – Imunocitochimic CIN2+ (CINtec​​®​ PLUS)

Imunocitochimic CIN2+ (CINtec® PLUS) este un test imunocitochimic dual de diagnostic predictiv utilizat pentru evaluarea calitativă a coexpresiei celulare a proteinelor p16INK4a și Ki67 pe material citologic cervico-vaginal. Acest test permite identificarea cu înaltă sensibilitate (94%)1 și specificitate (97,5%)1 a riscului de progresie către leziuni cervicale intraepiteliale de grad înalt (CIN2+)1,2.

Proteina p16INK4a este implicată în controlul ciclului celular, inițiind un mecanism de blocare a diviziunii celulare prin încetinirea progresiei din faza G1 în faza S. Astfel, în mod normal proteina p16INK4a acționează ca un factor supresor tumoral, blocând multiplicarea necontrolată a celulelor infectate cu HPV. In infecțiile HPV persistente, are loc sinteza oncoproteinelor virale E6 și E7, care inactivează genele supresoare tumorale p53 și RB conducând la instabilitatea genomica a celulelor epiteliale și la proliferarea necontrolată a acestora3.

Oncoproteina E7 inhibă funcția proteinei retinoblastomului (pRB) și abilitatea acesteia de a lega factorul de transcripție E2F, ceea ce conduce la acumularea (supraexpresia) proteinei p16INK4a care devine detectabilă imunocitochimic. Supraexpresia p16INK4a marchează momentul critic al transformării oncogenice a celulelor cu infecție HPV și este utilizată ca biomarker pentru leziunile cervicale precanceroase și canceroase4.

Proteina Ki67 este un marker de proliferare celulară și este exprimat în nucleul celulelor proliferative (e.g. celulele din stratul parabazal al epiteliului cervical normal). Asocierea în aceeași celulă a expresiei p16INK4a și Ki67 indică perturbarea ciclului celular ca marcă directă a activității oncogenice a HPV și reprezintă un criteriu obiectiv pentru selectarea pacientelor cu risc crescut de leziuni cervicale de grad înalt în vederea evaluării colposcopice.

Recomandările de testare includ:
– pacientele cu rezultat citopatologic cervico-vaginal de tip non-HSIL;
– pacientele cu rezultat rezultat pozitiv la genotiparea HPV pentru tulpini cu risc înalt.

Fig. 1. Algoritm pentru testarea Imunocitochimic CIN2+ (CINtec® PLUS).

• Cu 24-48 ore înainte de recoltarea probei trebuie să fie evitate: raporturile sexuale, lavajul vaginal, alte tratamente intravaginale (geluri, creme, contraceptive, dezinfectante, lubrifianți) sau alte manevre intravaginale (tampoane intravaginale, explorare vaginală).
• Se recomandă recoltarea în afara perioadei menstruale, în perioada de mijloc a ciclului menstrual, iar în cazul infecțiilor, după tratarea acestora.
• In cazul procedurilor medico-chirurgicale, se recomandă recoltarea înainte de examinarea manuală, înainte sau la minim 24 ore postcolposcopie cu aplicație de acid acetic, la 3 luni de la recoltări anterioare, iar în cazul electrorezecțiilor, polipectomiilor ca și postpartum ar trebui să existe un interval de 1.5-3 luni.

• Proba necorespunzătoare: flacon deteriorat, mediu de transport absent/insuficient, absența din flacon a capătului de recoltare al periuței.
• Proba neetichetată, fișa incompletă – fără datele clinice și de identificare complete ale pacientei.

Metoda
Procesarea pretestare imunocitochimică a materialul celular se realizează în sistem complet automatizat, similar preparatelor pentru examenul citopatologic cervico-vaginal Babeș-Papanicolau în mediu lichid și cuprinde separarea detritusurilor, etalarea celularității epiteliale și procesarea până la colorare.
Testarea Imunocitochimic CIN2+ (CINtec® PLUS) se realizează în sistem complet automatizat, utilizând un kit cu soluții de diagnostic prediluate care permite detecția imunocitochimică simultană a două proteine.

Etapele de procesare includ demascarea antigenică, inhibarea activității peroxidazei endogene, incubarea cu cei doi anticorpi primari și rularea a două sisteme de vizualizare a reacțiilor imunocitochimice în două culori diferite. Postprocesare, lamele cu materialul citologic testat sunt montate sub două medii de montare. Evaluarea lamelor se realizează cu ajutorul unui microscop optic, independent de morfologia celulară.

Interpretarea rezultatelor
Testul Imunocitochimic CIN2+ (CINtec® PLUS) este interpretat ca pozitiv atunci când există cel puțin o celulă care exprimă ambele proteine simultan, p16INK4a si Ki67. Supraexpresia p16INK4a este indicată de reacția citoplasmatică pozitivă (culoare maron), iar supraexpresia Ki-67 este indicată de reacția imunocitochimică nucleară (culoare roșie). Dublul semnal imunocitochimic atestă dereglarea ciclului celular pe fondul unor modificări ale genomului celular și indică potențialul evolutiv către o leziune de grad înalt.

Fig. 2. Test Imunocitochimic CIN2+ (CINtec® PLUS) pozitiv.

Limite și interferențe

• Nerespectarea indicațiilor referitoare la pregătirea pacientelor, la tehnica de recoltare și la condițiile de stabilitate a probelor poate influența negativ cantitatea și calitatea materialului celular analizat.
• Absența optimizării contracolorării cu hematoxilină nu permite interpretarea corectă a rezultatelor.
• Rezultatul testării Imunocitochimic CIN2+ (CINtec® PLUS) trebuie integrat în contextul prezentării clinice.

Bibliografie
1. Ikenberg H, Bergeron C, Schmidt D, Griesser H, Alameda F, Angeloni C, Bogers J, Dachez R, Denton K, Hariri J, Keller T, von Knebel Doeberitz M, Neumann HH, Puig-Tintore LM, Sideri M, Rehm S, Ridder R; PALMS Study Group. Screening for Cervical Cancer Precursors With p16/Ki-67 Dual-Stained Cytology: Results of the PALMS Study. J Natl Cancer Inst. 2013;105(20):1550-1557); PUBMED: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24096620.

2. Petry KU, Schmidt D, Scherbring S, Luyten A, Reinecke-Lüthge A, Bergeron C, Kommoss F, Löning T, Ordi J, Regauer S, Ridder R. Triaging Pap cytology negative, HPV positive cervical cancer screening results with p16/Ki-67 Dual-stained cytology. Gynecol Oncol. 2011 Jun 1;121(3):505-9. doi: 10.1016/j.ygyno.2011.02.033. Epub 2011 Mar 21.

3. Tornesello ML, Buonaguro L, Giorgi-Rossi P, Buonaguro FM. Viral and Cellular Biomarkers in the Diagnosis of Cervical Intraepithelial Neoplasia and Cancer. Hindawi Publishing Corporation BioMed Research International, Volume 2013, Article ID 519619, 10 pages, https://dx.doi.org/10.1155/2013/519619

4. Tsutsui T, Kumakura S, Yamamoto A, Kanai H, Tamura Y, Kato T, Anpo M, Tahara H, Barrett JC. Association of p16INK4a and pRb inactivation with immortalization of human cells. Carcinogenesis vol.23 no.12 pp.2111–2117, 2002